Анализ на антинуклеарные антитела, IgG, скрининг, ИФА

Антинуклеарные антитела (АНА) — это группа аутоантител, которые вырабатываются иммунной системой и направлены против собственных клеток и тканей организма. Обнаружение антинуклеарных антител в крови является важным диагностическим маркером многих аутоиммунных заболеваний, таких как системная красная волчанка, ревматоидный артрит, системная склеродермия и другие. Скрининговое исследование на антинуклеарные антитела класса IgG методом иммуноферментного анализа (ИФА) — это первый шаг на пути к выявлению и лечению этих серьезных патологий.

Что такое аутоиммунные заболевания и почему они возникают?

Аутоиммунные заболевания — это группа хронических патологий, при которых иммунная система ошибочно воспринимает собственные ткани организма как чужеродные и начинает вырабатывать против них антитела и иммунные клетки. Это приводит к развитию воспаления, повреждению и нарушению функции различных органов и систем.

Точные причины развития аутоиммунных заболеваний до сих пор не известны, но считается, что они возникают в результате сложного взаимодействия генетических, иммунологических и внешних факторов:

Генетическая предрасположенность

Некоторые варианты генов, регулирующих работу иммунной системы, могут повышать риск развития аутоиммунных заболеваний
Наличие аутоиммунных заболеваний у близких родственников увеличивает вероятность их развития и у вас

Иммунологические нарушения

Дефекты в работе регуляторных (супрессорных) Т-лимфоцитов, которые в норме подавляют активность аутореактивных клонов клеток
Нарушения в процессах распознавания «своего» и «чужого», приводящие к срыву толерантности к собственным тканям
Молекулярная мимикрия — сходство некоторых инфекционных агентов с компонентами собственных клеток, приводящее к перекрестным иммунным реакциям

Внешние факторы

Инфекции (особенно вирусные), которые могут запускать или обострять аутоиммунные процессы
Стрессы, физические и психоэмоциональные перегрузки, нарушающие работу иммунной и нейроэндокринной систем
Ультрафиолетовое излучение, токсические вещества и лекарства, гормональные изменения, способные модулировать иммунный ответ

В результате этих нарушений иммунная система начинает вырабатывать антитела против различных компонентов собственных клеток — ядерных и цитоплазматических белков, ферментов, рецепторов, ДНК и др. Эти аутоантитела связываются с соответствующими антигенами и запускают каскад иммунных реакций, приводящих к развитию аутоиммунного воспаления и повреждению тканей.

Какие бывают антинуклеарные антитела и что они означают?

Антинуклеарные антитела — это большая группа аутоантител, которые распознают различные компоненты клеточного ядра. В зависимости от типа ядерных антигенов, с которыми они реагируют, АНА подразделяются на несколько подтипов:

Антитела к двуспиральной ДНК (анти-дсДНК)

Высокоспецифичный маркер системной красной волчанки (СКВ)
Обнаруживаются у 60-90% пациентов с СКВ
Коррелируют с активностью заболевания и риском развития волчаночного нефрита

Антитела к экстрагируемым ядерным антигенам (ЭЯА)

Анти-Sm — специфичный маркер СКВ, выявляется у 20-30% пациентов
Анти-U1-RNP — маркер смешанного заболевания соединительной ткани (СЗСТ)
Анти-SS-A/Ro и анти-SS-B/La — маркеры синдрома Шегрена и СКВ
Анти-Scl-70 — маркер системной склеродермии, ассоциирован с диффузной формой заболевания и интерстициальным поражением легких
Анти-Jo-1 — маркер полимиозита и дерматомиозита, ассоциирован с антисинтетазным синдромом

Антитела к гистонам

Обнаруживаются при лекарственной волчанке, индуцированной приемом гидралазина, прокаинамида, изониазида и др.
Могут выявляться при СКВ и ревматоидном артрите (РА)

Антитела к центромерам

Маркер ограниченной формы системной склеродермии (CREST-синдром)
Ассоциированы с легочной гипертензией и поражением пищевода

Антитела к цитоплазматическим антигенам

Антинейтрофильные цитоплазматические антитела (АНЦА) — маркеры системных васкулитов (гранулематоза с полиангиитом, микроскопического полиангиита, эозинофильного гранулематоза с полиангиитом)
Антитела к рибосомальному Р-белку — маркер нейропсихических проявлений СКВ
Антитела к аминоацил-тРНК-синтетазам — маркеры антисинтетазного синдрома при полимиозите/дерматомиозите

Наличие и титр различных типов АНА имеют важное диагностическое и прогностическое значение при аутоиммунных заболеваниях. Однако следует помнить, что антинуклеарные антитела могут обнаруживаться и у здоровых людей (особенно в низких титрах), а также при некоторых инфекциях, опухолях и после приема certain drugs. Поэтому интерпретация результатов исследования на АНА должна проводиться только с учетом клинической картины и данных других лабораторных и инструментальных методов.

Кому и когда назначают скрининг на антинуклеарные антитела?

Скрининговое исследование на антинуклеарные антитела класса IgG методом ИФА обычно назначается в следующих случаях:

При наличии клинических симптомов, подозрительных на аутоиммунное заболевание:

Необъяснимая лихорадка, слабость, снижение массы тела
Боли в суставах, мышцах, утренняя скованность
Кожные высыпания (эритема, фотосенсибилизация, язвы, синдром Рейно)
Серозиты (плеврит, перикардит)
Поражение почек (протеинурия, гематурия, отеки)
Неврологические нарушения (судороги, психоз, когнитивные расстройства)

При отклонениях в общем анализе крови и биохимических тестах:

Анемия, лейкопения, тромбоцитопения
Повышение СОЭ и С-реактивного белка
Гипергаммаглобулинемия
Повышение печеночных ферментов (АЛТ, АСТ)

При наличии аутоиммунных заболеваний у близких родственников (семейный анамнез)
При необъяснимых репродуктивных потерях (выкидыши, замершие беременности)
При некоторых неврологических синдромах (рассеянный склероз, оптиконевромиелит)

Скрининг на АНА не является строго специфичным тестом и служит для первичной оценки вероятности наличия аутоиммунного процесса. При положительном результате скрининга необходимо дальнейшее обследование с определением отдельных подтипов АНА (анти-дсДНК, ЭЯА и др.) и других иммунологических маркеров для уточнения диагноза.

Как проводится анализ на антинуклеарные антитела методом ИФА?

Иммуноферментный анализ (ИФА) — это широко используемый лабораторный метод для определения антител и других белков в биологических жидкостях. Он основан на специфическом связывании антигенов с антителами и последующей ферментативной реакции, позволяющей визуализировать и количественно оценить образовавшиеся иммунные комплексы.

Для определения АНА методом ИФА используются специальные планшеты, на дно лунок которых нанесены очищенные ядерные антигены (ДНК, гистоны, ЭЯА и др.). При внесении в лунки образца сыворотки крови пациента антинуклеарные антитела связываются с соответствующими антигенами и образуют иммунные комплексы на поверхности планшета.

После этапа инкубации и отмывки в лунки добавляют вторичные антитела против иммуноглобулинов класса G человека, которые меченые ферментом (обычно пероксидазой хрена). Эти антитела связываются с иммунными комплексами АНА на поверхности планшета.

Далее в лунки вносят субстрат для фермента, который под действием пероксидазы превращается в окрашенный продукт. Интенсивность окраски раствора в лунках пропорциональна количеству связавшихся АНА. Ее измеряют на спектрофотометре и сравнивают с калибровочной кривой, построенной по стандартным образцам с известной концентрацией АНА.

Результаты ИФА на АНА обычно выражаются в виде количественного значения (ед/мл или МЕ/мл) или в виде титра (кратности разведения сыворотки, при котором еще определяются антитела). Положительным считается результат, превышающий верхнюю границу референсного интервала, который устанавливается производителем тест-системы или лабораторией.

Как интерпретируются результаты скрининга на антинуклеарные антитела?

Интерпретация результатов скринингового ИФА на АНА зависит от их количественного уровня, а также от клинической картины и данных других лабораторных тестов. В целом, возможны следующие варианты:

Отрицательный результат (АНА не обнаружены или их уровень ниже порогового значения)

Аутоиммунное заболевание маловероятно
В редких случаях возможны ложноотрицательные результаты на ранних стадиях болезни или при приеме иммуносупрессивных препаратов
При сохранении подозрения на аутоиммунную патологию необходимо дополнительное обследование или повторный анализ через 2-3 месяца

Слабоположительный результат (уровень АНА незначительно превышает верхнюю границу нормы)

Возможно носительство АНА без клинических проявлений (встречается у 5-20% здоровых людей)
Может отражать начальную стадию аутоиммунного процесса или наличие другой патологии (инфекции, опухоли, лекарственной гиперчувствительности)
Требует дополнительного обследования и динамического контроля АНА

Положительный результат (уровень АНА значительно превышает верхнюю границу нормы)

Высокая вероятность наличия аутоиммунного заболевания, особенно при наличии характерных клинических симптомов
Необходимо дальнейшее обследование для уточнения типа АНА (анти-дсДНК, ЭЯА и др.) и подтверждения диагноза
Titр АНА и его динамика могут использоваться для оценки активности заболевания и эффективности терапии

Следует помнить, что положительный результат скрининга на АНА сам по себе не является диагнозом и требует комплексной оценки клинических, лабораторных и инструментальных данных. Только опытный врач-ревматолог или иммунолог может правильно интерпретировать результаты анализа и поставить окончательный диагноз аутоиммунного заболевания.